探讨流体剪切力对细胞活动的影响

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探讨流体剪切力对细胞活动的影响

2016-05-05 13:32:00 来源：

探讨流体剪切力对细胞活动的影响--流体剪切力对细胞吸收人造细胞器的影响丹麦奥胡斯大学的纳米科学中心近日在SMALL杂志上发表了一篇关于纳米材料作为有细胞活性人造细胞器的文章。文章介绍了个有趣的现象：细胞在剪切力条件下培养的时候，会吸收更多的纳米颗粒，并且没有附加的细胞毒性。文章中采用了内皮细胞和巨噬细胞做为实验细胞。将细胞培养在ibidi通道载玻片中，之后使用含有纳米颗粒的培养基，以一定的剪切力刺激细胞，细胞吸收的纳米颗粒的量比静置状态下有显著的升高。分享一下这个实验的细节，或许大家可以从中找到自己研究领域的灵感。
一、实验准备实验材料及设备细胞：内皮细胞、巨噬细胞纳米颗粒：pPDA：在800nm直径的二氧化硅表面包被多聚多巴胺（dopamine） pPEG：在800nm直径的二氧化硅表面包被多聚乙二醇（ethylene glycol） pRGD：在800nm直径的二氧化硅表面包被L-精氨酸、甘氨酸和L-天门冬氨酸的多聚物（Arginylglycylaspartic acid ( RGD ) is a tripeptide composed of L -arginine , glycine , and L -aspartic acid）培养耗材：ibidi六通道载玻片μ-Slide VI0.4 Luer （ibidi，Germany，80606）灌流管，15cm，1.6mm直径（ibidi，Germany，10962）串联管（ibidi，Germany，10830）封口夹仪器设备：ibidi流体剪切力系统，含空气泵（ibidi，Germany，10905）和流体单元（ibidi，Germany，10903）实验方法在实验开始前一天，请将所有需要使用的试剂，培养基，通道载玻片，灌流管都在37℃的二氧化碳培养箱中放置过夜，排除由于温度差产生的微量气泡。
二）培养细胞准备内皮细胞和巨噬细胞，按照常规细胞培养方法进行培养。*好使用比较健康的内皮细胞，以防在做流体实验时候细胞不能稳定贴壁。按照下面流程铺细胞：按每通道10000个巨噬细胞和40000个内皮细胞将细胞铺于通道载玻片的中，注意，将移液器头插入注液孔中再加入细胞悬液，可以轻微倾斜通道载玻片帮助细胞悬液充满整个通道。盖上注液孔盖，将通道载玻片放入细胞培养箱中培养半小时，等待细胞贴壁。细胞贴壁后，拿出通道载玻片，在每个注液孔中分别加入60μl培养基，注意，枪头要悬在孔上方滴入培养基。将通道载玻片再放入二氧化碳培养箱进行培养2-4小时左右，等到细胞刚刚长满为单细胞层，即可开始实验。注意，要使用单层细胞进行剪切力实验，使每个细胞均受到均匀的剪切力。
二、搭建流体系统将灌流管按照说明放在置在流体单元上。在灌流管的储液管中加入含纳米颗粒的7.5ml培养基。这时不需要连接通道载玻片。实验前需要去除整个灌流管中的气泡，存留在灌流系统的气泡会影响剪切力的大小，有时还会使灌流系统中的液体流动停滞。打开ibidi泵控制系统，在任务栏中找到“Remove air bubbles”，ibidi流体剪切力系统将自动运行下面任务，用于去除气泡。（表一）连接通道载玻片。使用串联管，将通道串联起来。这样可以在同一个条件，同一种液体的刺激下培养不同的样本。
在细胞贴壁后，将串联管如如图示插入串联管在每一个注液孔中加满培养基，要注意不能把气泡加入在注液孔中。用1ml的无菌注射器吸满培养基，小心插入如图的孔中，不要引入气泡。小心推入培养基，直到*个串联管有培养基微微冒出。小心的将串联管弯过来，插入相邻的注液孔中。不要产生气泡。继续推动注射器，直到第二根串联管也被充满，继续推动注射器充满下一根串联管。重复上面的操作，继续充满所有的通道和串联管。将所有的串联管连接好后，将加满液体排除气泡的灌流管用封口夹夹住。小心将灌流管的一个鲁尔接头从联通管中拔出，插入*后一个注液孔中。小心将注射器移除，在注液孔中加满培养基，将灌流管的另一个接头插入。串联灌流系统搭建完成。

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邵琼女士

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